ANÁLISIS DE ADN FORENSE

1. DETERMINACIÓN DE LA PATERNIDAD Y LA MATERNIDAD.
2. RELACONES ENTRE TIOS Y SOBRINOS.
3. FILIACIÓN CON PADRE FALLECIDO.
4. ABUELISMO.
5. HERMANDAD.
6. IDENTIFICACIÓN DE INDIVIDUOS POR ADN.
7. PERICIAS. IMPUGNACIONES. ASESORAMIENTOS LEGALES.
8. CONSULTORIAS TECNICAS.
9. TESTIGOS EN TOMAS DE MUESTRAS EN PERSONAS VIVAS Y EN EXHUMACIONES.
10. CONTROL EXTRICTO DE LA CADENA DE SEGURIDAD .
11. ESTUDIOS DE ADN A PARTIR DE MUESTRAS DE SANGRE, HISOPADO BUCAL, PELOS, UÑAS, MUESTRAS CADAVÉRICAS, SEMEN Y OTROS.

El laboratorio PRIMAGEN realiza estudios forenses por técnicas de ADN-PCR desde el año 1990.
Mantiene un contrato con la Corte Suprema de Justicia de la Nación Argentina como "laboratorio de Polimorfismos de ADN" para el Cuerpo Medico Forense.
Realiza los controles anuales internacionales de Calidad pertenecientes al Grupo Español y Portugués de la Sociedad Internacional de Genética Forense (GEP - ISFG).

DETERMINACIÓN BIOLÓGICA DE FILIACIÓN.

INTRODUCCIÓN.

LA INVESTIGACIÓN BIOLÓGICA DE LA FILIACIÓN POR TECNICAS DE ADN ES UNA DE LAS PRUEBAS MAS SEGURAS Y EFICACES DE LAS QUE DISPONE HOY EN DÍA LA MEDICINA LEGAL.

A partir de las técnicas moleculares empleadas por la genética moderna se ha podido establecer que cada individuo posee diferencias en su material genético o lo que es lo mismo de su ADN. Este fenómeno nos HACE ÚNICOS o dicho a la inversa DIFERENTES A CUALQUIER OTRO, con la única excepción de los gemelos idénticos.
Desde hace varios años la prueba biológica de la filiación se realiza analizando los llamados marcadores genético - moleculares que son polimorfismos genéticos, con herencia Mendeliana simple. Con esto estamos diciendo que para cada marcador todos los individuos poseen dos alelos, uno proveniente de la madre y otro del padre.
Para explicar que es un marcador genético molecular es necesario establecer que muchas de las sustancias biológicas de nuestro cuerpo, como por ejemplo las proteínas, presentan diferencias, que están revelando variantes del ADN de ese organismo y que definen un polimorfismo.
Si bien cualquier característica hereditaria puede ser utilizada para la investigación de la paternidad o de la identidad de una persona, el rigor de la prueba exige una particular selección de cual de ellas es preferible emplear.
Durante más de 50 años la determinación de las diferencias entre las personas, o sea el polimorfismo, se fundamentó en los clásicos grupos sanguíneos ABO. Seguidamente fueron implementándose otros marcadores o sistemas genéticos, en sangre humana, algunos de los cuales todavía se utilizan siendo mas de 20 (ABO, Rh, MNSs, Kell, Duffy, Kidd, ACP, ADA, AK, ESD, GLO, 6PGD, PGM1, BF, C3, GC, HP, PI, PLG, TF, Gm, Km y HLA-A, HLA-B). Los mismos actualmente son sustituidos por los polimorfismos del ADN por ser sistemas mucho mas informativos. El ADN por si solo es aproximadamente 10 veces mas poderoso que los 20 sistemas mencionados teniendo un 99.90% de poder de inclusión o exclusión, de paternidad o maternidad, según la técnica y los sistemas empleados.
La transición entre el HLA, ADN y el ADN con la técnica denominada PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) representa la realidad actual para el procesamiento de cualquier muestra biológica. Su rapidez y precisión, establecen una de las evidencias biológicas mas confiables y valiosas tanto en las causas civiles como penales.
El valor real de la prueba biológica no podrá ser utilizado ni podrá ser correctamente evaluado si no se aplica a la misma la Teoría de la probabilidad.
No existe ningún procedimiento humano o biológico seguro al 100 % pero el perito considera por convención que la Probabilidad de Paternidad (PP. ó W) superior al 99,73 % es "prácticamente probada", (Predicados verbales de Hummel, Medicina Legal y Toxicología; 4ta. ed. J.A. Gisbert Calabuig. p. 1039, Salvat, 1991) si bien tal decisión no compete al perito sino al juez. En una investigación biológica de la paternidad es necesario analizar varios marcadores o sistemas genéticos, en el trío clásico Madre (M), Hijo (H) y Presunto Padre o Padre Alegado (PA). Si de estas determinaciones surge que es el padre biológico, la pregunta que sigue es cuan probable es que lo sea. Para contestar a esta pregunta es necesario recurrir al Teorema de Bayes. Este es el teorema base de los cálculos de la probabilidad de la paternidad y es uno de los teoremas mas valiosos de la estadística. (C.Aitken y D.Stoney. The use of statistics in Forensic Science. Ellis Horwood. N.Y. 1991.)
El otro aspecto importante a determinar es la Probabilidad a Priori (Po.). Es un valor que establece el perito, de no haber otra indicación por parte del Juez, que equivale a considerar las probabilidades que tiene el padre alegado (PA) de ser el padre biológico o no. El valor arbitrario de 0.5 establecido, considera como un principio conservador que el padre alegado (PA) tiene tantas posibilidades de ser el padre biológico como de no serlo. El otro aspecto es comparar la probabilidad que tiene el presunto padre de serlo, con un hombre al azar en la población. Normalmente el perito escoge la población del entorno del caso, lo que generalmente coincide con un grupo poblacional concreto.
Finalmente existen otros procedimientos para completar la información obtenida en el caso de la prueba genética. El mas conocido es el Índice de Paternidad (IP) que permite una valoración fácil y comprensible del resultado final. Muestra la posibilidad de paternidad y se calcula teniendo en cuenta la frecuencia poblacional del alelo aportado por el padre alegado (PA).
El Índice Combinado de Paternidad (ICP), es el producto de los IP calculados de los sistemas empleados en el caso a estudiar y expresa cuantas mas posibilidades tiene el padre alegado (PA) de ser el padre biológico que un hombre al azar dentro de la población estudiada.

TÉCNICA DEL ADN y PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa).

Esta técnica analiza el ADN con el denominado método de reacción en cadena de la polimerasa y ha sido aceptado y aprobado para los test de paternidad por la AABB (American Association of Blood Banks) y por científicos del FBI (Federal Bureau of Investigations).
Con el método denominado PCR los segmentos de ADN pueden ser reproducidos millones de veces a partir de una copia de ADN original, proveniente de unas pocas células, a veces solamente una de ellas. En el año 1991 el FBI publicó sus investigaciones en relación a la efectividad de los estudios realizados con las técnicas de ADN y PCR. (Comey, CT; Budowle, B. J. Forensic Sciences 36 (6) 1991) Sus conclusiones más relevantes son que la amplificación del ADN por técnicas de PCR a partir de muestras de ADN, contaminadas con sustancias diversas tales como lavandina, gasolina o expuestas prolongadamente al sol, demostraron una alta resistencia en el sentido que no se alteraron por esto los resultados.
Las determinaciones por ADN-PCR son aceptadas actualmente por las cortes en cientos de casos, civiles y penales.

IDENTIFICACIÓN DE LAS PERSONAS Y CADENA DE CUSTODIA DE LA MUESTRA QUE SE REALIZA EN EL LABORATORIO PRIMAGEN.

Todas las personas involucradas en el estudio son identificadas mediante:
1. Documentos de identidad
2. Fotografía
3. Huella dactilar del pulgar derecho
4. Con la información obtenida se completa una ficha, donde la persona identificada firma dando su conformidad de los datos allí expresados.
5. Se firma un formulario de consentimiento y autorización del estudio.
6. Las tomas de muestras se realizan frente a testigos, preferentemente los abogados de las partes, escribano o personas convocadas para tal fin. En caso de no concurrir persona alguna como testigo, personal del laboratorio oficiará de testigo firmando en calidad de tal.

METODOLOGÍA EMPLEADA POR EL LABORATORIO PRIMAGEN

TOMA DE LA MUESTRA

El ADN puede aislarse a partir de casi todas las células del organismo humano, habiéndose demostrado en numerosas investigaciones forenses y de paternidad que aunque se haya aislado de diferentes tejidos o células, reproducirá para un mismo individuo los mismos patrones de tipificación.
Las muestras para la tipificación del ADN se obtienen de cualquier tejido de nuestro cuerpo, generalmente sangre por punción venosa. Sin embargo desde hace mas de cinco años el método que se va imponiendo es la DETERMINACIÓN DEL ADN POR HISOPADO DE LA MUCOSA BUCAL. ( R.A. Bever, Fourth Int. Symp. on Human Identification 1993.) En este método mal llamado de la saliva, se obtienen miles de células que se desprenden de la boca, lengua, mejillas etc. las cuales contienen la cantidad necesaria de ADN para la determinación de una filiación o la identificación de un individuo, con el mismo grado de certeza que el de la sangre. (R. B. Skoletsky y col., Human Molecular Genetics, 2 (2), 1993). Un ejemplo de la amplia experiencia científica que se tiene con el mismo es el hecho que desde 1991 lo utilizan como método de elección los laboratorios forenses de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos para la identificación de sus integrantes.(Second Int. Symp. on Human Identification 1991.).

Ventajas y beneficios del hisopado bucal:

• Método no invasivo. No requiere punzar la piel, no hay agujas, no hay sangre, evitando traumatismos e infecciones especialmente en niños y recién nacidos. Evita la ansiedad.
• Fácil y simple. Solo requiere un suave raspado de la parte interna de la mejilla. El procedimiento requiere un total de 4 a 8 hisopos por persona. La recolección de la muestra solo toma unos minutos.
• A diferencia de la sangre, los hisopos no son sensibles al tiempo ni a la temperatura.
• Al no usar tubos de vidrio se evita ruptura de frascos con la consiguiente perdida de muestras y riesgos inherentes al contacto con sangre, sida, hepatitis, etc.
• No tiene restricción de edad.
• Es un método científicamente aceptado. Al igual que muchos de los sistemas de ADN provee un poder de exclusión de la paternidad superior al 99.50% y una probabilidad de paternidad superior al 99%.

FILIACIÓN PRENATAL

TOMA DE LA MUESTRA

El ADN puede aislarse a partir de casi todas las células del organismo humano, habiéndose demostrado en numerosas investigaciones forenses y de paternidad que aunque se haya aislado de diferentes tejidos o células, reproducirá para un mismo individuo los mismos patrones de tipificación.
Las muestras para la tipificación del ADN se obtienen de cualquier tejido de nuestro cuerpo, generalmente sangre por punción venosa. En aquellos casos donde el estudio deba realizarse prenatalmente, la muestras a estudiar serán obtenidas por punción transabdominal para obtener vellosidades coriales (Biopsia coriónica) o liquido amniótico (Amniocentesis) según el estadio del embarazo.
Biopsia coriónica : Este procedimiento que se encuentra disponible en la practica medica desde l984, consiste en la obtención de una muestra del trofoblasto ovular en el primer trimestre de la gestación. A través de diferentes formas de abordaje, es posible obtener vellosidades coriales (V.C) que integran el trofoblasto y que tienen origen en la cigota reflejando por lo tanto la constitución genética del feto.
Esta técnica se efectúa a partir de la décima semana de la gestación, utilizando una aguja de punción espinal que se introduce en el abdomen materno hasta alcanzar el tejido trofoblástico en su eje longitudinal. Todo el procedimiento se efectúa bajo seguimiento ecográfico continuo y tiene un 0.5% de riesgo de perdidas fetales.
En muestras de biopsia coriónica se considero suficiente material entre 10-20 mg de tejido fetal, las cuales fueron disecadas de todo residuo materno.
Amniocentesis : La amniocentesis es la técnica mediante la cual se obtiene una muestra de liquido amniótico (L.A.) efectuando una punción transabdominal. La aguja, se introduce bajo seguimiento ecográfico a través de la pared abdominal atravesando las estructuras subyacentes hasta llegar al saco amniótico de donde se aspiran veinte centímetros cúbicos de liquido amniótico. La amniocentesis involucra un riesgo potencial para la madre y el feto, aproximadamente de 0,3 % . Para las muestras de liquido amniótico se tomaron de 10 a 20 ml.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS.

Cuando se evalúa un test de paternidad, es esencial tener presente que cada persona tiene dos marcadores genéticos (alelos), uno proveniente de la madre y otro proveniente del padre. A excepción del sistema HPRTB que se halla en el cromosoma X, por lo cual las mujeres normales (XX) presentan dos alelos, uno coincidente con cada progenitor y en los hombres normales (XY) solo se presenta un alelo obligatoriamente de la madre.
Lo primero que se deberá analizar en los resultados obtenidos es que marcadores tienen en común la madre (M) y el hijo (H). El otro marcador que se encuentra en el niño debe forzosamente provenir del padre biológico. Si el padre alegado (PA) tiene el mismo marcador no podrá ser excluido.
Al analizar un informe de paternidad lo primero que se debe determinar es si el padre alegado es excluido. Esto significa que algunos marcadores hallados en el niño no se hallan presentes en ninguno de los progenitores alegados. En la exclusión de la paternidad no se realizan cálculos estadísticos, dándose por finalizado el estudio.
Si en cambio la persona investigada no es excluida, deberán realizarse dos cálculos matemáticos comunes en los test modernos de paternidad: el Índice Combinado de Paternidad (ICP) y la probabilidad de paternidad (PP ó W) mediante la aplicación del Teorema de Bayes.
Si por ejemplo el ICP es 100 a 1, significa que el Padre Alegado tiene 100 veces mas posibilidades de ser el Padre Biológico que las que tiene un hombre tomado al azar dentro de la población estudiada.
La probabilidad estadística de paternidad (PP ó W) nos dice cuan probable es que el hombre investigado sea el padre biológico, no incluyendo las evidencias no genéticas, generalmente consideradas por la Probabilidad a Priori (Po) en 0.5.